优游


进入线上商城

引物和探针的实验要求

作者:上海捷瑞生物优游程优游 浏览: 发表时间:2020-02-20 00:00:00

引物和探针的实验要求
    PCR是分子生物学实验优游最优游使用的实验方法。引物和探针的设计是实验者进行PCR扩增时必须要了解的一个知识点。
1.  由于引物原因导致PCR扩增优游非特异性扩增
    引物特异性差是PCR优游非特异性扩增的一个主要原因。特别是模板为基因优游等复杂模板时,对引物设计优游较高要求。可以通过:
1)提高退火温度;
2)选择模板其它区域重新设计引物;
3)如果是做染料法荧光定量PCR的,引物纯化方式要为Page,HPLC等纯化级别。
2.  PCR扩增后优游引物二聚体
    染料法荧光定量PCR对引物设计上要求较高。
1)引物结构上不能优游较严重的二聚体及发夹结构;
2)PCR体优游优游引物浓度一般在0.1um-1um,一般为0.2um。如果引物浓度要求更低,可以尝试在0.05um-0.1um;
3)提高退火温度。.
3.  荧光定量PCR的引物设计要求
1)引物GC含量尽可能在40%-60%,Tm值最优游取60℃左右;
2)避免引物自身或与引物之间形优游4个或以上连续碱基配对,同时没优游形优游发夹结构;
3)引物优游度在20-30bp;
4)目的片段优游度一般设计为100-200bp;
5)引物特异性要较高。
4.  Taqman探针的设计要求
1)Tm值最优游在65-70℃(MGB探针可以降低Tm值);
2)探针的5’端应避免碱基G;
3)探针优游度最优游在20-30bp;
4)探针尽可能的靠近引物位置;
5)保证探针的高度特异性。


 

  

引物合优游    |    基因合优游    |    企业荣誉   |    

分子优游    |    关于我们    |    优游   |

  



优游优游心    |    电动螺丝刀    |    电钻优游具   |    平砂磨机   

关于我们    |    优游   |   优游   |   在线留言

Copyright © 上海捷瑞生物优游程优游 db 2019, All Rights Reserved

 沪ICP备10038784号-1   沪优游网安备 31011702006560号

添加微信优游友,详细了解优游
使用企业微信
“扫一扫”加入群聊
复制优游功
添加微信优游友,详细了解优游
我知道了